유세포 분석기(Flow cytometry, FCM)는 염색된 세포 마커의 형광 강도를 측정하는 세포 분석기입니다. 단일세포의 분석과 분류를 기반으로 개발된 첨단기술입니다. 세포의 크기, 내부 구조, DNA, RNA, 단백질, 항원 및 기타 물리적 또는 화학적 특성을 신속하게 측정하고 분류할 수 있으며 이러한 분류의 집합을 기반으로 할 수 있습니다.
유세포 분석기는 주로 다음과 같은 5가지 부분으로 구성됩니다.
1 흐름 챔버 및 유체 시스템
2 레이저 광원 및 빔 성형 시스템
3 광학계
4 전자, 보관, 디스플레이 및 분석 시스템
5 세포분류시스템
그 중 레이저 광원 및 빔 형성 시스템의 레이저 여기는 유세포 분석에서 형광 신호를 측정하는 주요 방법입니다. 여기광의 강도와 노출 시간은 형광 신호의 강도와 관련이 있습니다. 레이저는 단일 파장, 고강도, 안정성이 높은 조명을 제공할 수 있는 간섭성 광원입니다. 이러한 요구 사항을 충족하는 이상적인 여기 광원입니다.
레이저 소스와 유동 챔버 사이에는 두 개의 원통형 렌즈가 있습니다. 이 렌즈는 레이저 소스에서 방출된 원형 단면의 레이저 빔을 더 작은 단면(22 μm × 66 μm)의 타원형 빔에 집중시킵니다. 이 타원형 빔 내의 레이저 에너지는 정규 분포에 따라 분포되어 레이저 감지 영역을 통과하는 세포에 대해 일관된 조명 강도를 보장합니다. 반면에 광학 시스템은 여러 세트의 렌즈, 핀홀 및 필터로 구성되며 이는 대략 흐름 챔버의 업스트림과 다운스트림의 두 그룹으로 나눌 수 있습니다.
흐름 챔버 앞의 광학 시스템은 렌즈와 핀홀로 구성됩니다. 렌즈와 핀홀(보통 두 개의 렌즈와 핀홀)의 주요 기능은 레이저 소스에서 방출된 원형 단면의 레이저 빔을 더 작은 단면의 타원형 빔에 집중시키는 것입니다. 이는 정규 분포에 따라 레이저 에너지를 분배하여 레이저 감지 영역 전체에 걸쳐 세포에 대한 일관된 조명 강도를 보장하고 미광으로 인한 간섭을 최소화합니다.
필터에는 세 가지 주요 유형이 있습니다.
1: LPF(Long Pass Filter) - 특정 값보다 높은 파장의 빛만 통과시킵니다.
2: SPF(단거리 통과 필터) - 특정 값보다 낮은 파장의 빛만 통과시킵니다.
3: 대역 통과 필터(BPF) - 특정 파장 범위의 빛만 통과하도록 허용합니다.
다양한 필터 조합을 통해 다양한 파장의 형광 신호를 개별 광전자 증배관(PMT)으로 전달할 수 있습니다. 예를 들어 PMT 앞의 녹색형광(FITC)을 검출하는 필터로는 LPF550과 BPF525가 있다. PMT 앞의 주황색-빨간색 형광(PE)을 감지하는 데 사용되는 필터는 LPF600 및 BPF575입니다. PMT 앞부분의 적색형광(CY5)을 검출하는 필터는 LPF650과 BPF675이다.
유세포 분석법은 주로 세포 분류에 사용됩니다. 컴퓨터 기술의 발전, 면역학의 발전, 단일클론항체 기술의 발명으로 인해 생물학, 의학, 약학 및 기타 분야에서의 응용이 점점 더 광범위해지고 있습니다. 이러한 응용 분야에는 세포 역학 분석, 세포 사멸, 세포 유형 분석, 종양 진단, 약물 효능 분석 등이 포함됩니다.
게시 시간: 2023년 9월 21일
